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A No processo de configuração do sistema, componentes como primers e enzimas estão em excesso, mas os moldes não estão em excesso.As moléculas de DNA modelo entram aleatoriamente em cada pequeno sistema de reação.Após a amplificação por PCR, o sistema que contém o molde completa a amplificação e o sistema não contém o molde sem amplificação.
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A Causa: A cepa está mutada e a sonda atual não é adequada para detecção;o ácido nucléico causado pelo método de extração (falha na extração completa das bactérias, fungos, etc. incluídos na amostra) não pode ser detectado;
Verificação de exclusão: a extração de DNA da cultura, seguida de amplificação com nossas sondas, pode ser verificada;recomenda-se que a hemocultura e o teste de ácido nucleico sejam a mesma amostra de sangue.
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A Padrão de julgamento ≥ 3 gotas positivas, mas para as gotas positivas no ponto crítico, é necessário realizar uma análise aprofundada em combinação com materiais de controle de qualidade negativo/positivo.Quando há uma linha vertical de sinais, ela é julgada como um sinal não positivo.
amostras de baixa concentração, um buffer múltiplo mais alto pode ser selecionado para ajuste de carga de amostra.
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A Plasma : ≥ 2ml é recomendado, os componentes são relativamente simples e a contaminação do DNA humano é removida.A composição do ácido nucleico é mais simples e a concentração de ácido nucleico bacteriano é maior, o que é conveniente para detecção.
Nota: A velocidade de rotação não deve ser muito alta durante a centrifugação, caso contrário, facilmente levará à perda de bactérias intracelulares e afetará o resultado final do teste;
Sangue total: ≥4ml é recomendado, os componentes são relativamente completos e a consistência com amostras de hemocultura é boa, mas há contaminação de DNA humano.
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A Bactérias (bactérias Gram-positivas, bactérias Gram-negativas), fungos invasivos, vírus.Ao mesmo tempo, a detecção de genes de resistência a drogas também pode ser realizada.
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A Recomenda-se configurar um experimento de controle para a divisão.Quando não definido, geralmente use a intensidade de fluorescência de 3000 como ponto limite ou use o cluster negativo como referência para avaliar o positivo.Você pode consultar a experiência da citometria de fluxo para fazer uma divisão.
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A A quantificação da fluorescência é baseada na curva de amplificação.O sinal de detecção de cada ciclo será calculado pelo logaritmo de 2 à potência N, que só pode ser usado para distinguir a diferença de mais de 2 vezes.O sistema de PCR digital pode detectar diferenças de expressão gênica tão baixas quanto 0,1 vezes pela fórmula de cálculo da distribuição de Poisson.
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A Para frequência de mutação, a PCR digital pode chegar a 0,01% ou menos, e uma única cópia pode ser obtida para microorganismos;RT-PCR pode atingir apenas 1%.
