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A No processo de configuração do sistema, componentes como iniciadores e enzimas estão em excesso, mas os modelos não estão em excesso. As moléculas de DNA de modelo entram aleatoriamente em cada pequeno sistema de reação. Após a amplificação por PCR, o sistema que contém o modelo completa a amplificação e o sistema não contém o modelo sem amplificação.
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A Causa: A tensão é mutada e a sonda atual não é adequada para detecção; O ácido nucleico causado pelo método de extração (falha em extrair completamente as bactérias, fungos etc. incluído na amostra) não pode ser detectado;
Verificação de exclusão: a extração de DNA da cultura, seguida de amplificação com nossas sondas, pode ser verificada; Recomenda -se que a cultura do sangue e o teste de ácido nucleico sejam a mesma amostra de sangue.
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A Padrão de julgamento ≥ 3 gotículas positivas, mas para as gotículas positivas no ponto crítico, é necessário realizar análises profundas em profundidade em combinação com materiais de controle de qualidade negativa/ positiva. Quando há uma linha vertical de sinais, ela é julgada como um sinal não positivo.
Amostras de baixa concentração, um buffer múltiplo mais alto pode ser selecionado para o ajuste de carregamento da amostra.
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A Plasma: ≥ 2ML é recomendado, os componentes são relativamente simples e a contaminação do DNA humano é removida. A composição do ácido nucleico é mais simples e a concentração de ácido nucleico bacteriano é maior, o que é conveniente para a detecção.
Nota: A velocidade de rotação não deve ser muito alta durante a centrifugação, caso contrário, levará facilmente à perda de bactérias intracelulares e afetará o resultado do teste final;
Sangue inteiro: ≥4ml é recomendado, os componentes são relativamente completos e a consistência com as amostras de cultura sanguínea é boa, mas há contaminação do DNA humano.
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A Bactérias (bactérias gram-positivas, bactérias gram-negativas), fungos invasivos, vírus. Ao mesmo tempo, a detecção de genes de resistência a medicamentos também pode ser realizada.
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A Recomenda -se configurar um experimento de controle para a divisão. Quando não estiver definido, geralmente usa a intensidade da fluorescência de 3000 como ponto limite ou use o cluster negativo como referência para julgar o positivo. Você pode se referir à experiência da citometria de fluxo para fazer uma divisão.
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A A quantificação de fluorescência é baseada na curva de amplificação. O sinal de detecção de cada ciclo será calculado pelo logaritmo de 2 para a potência N, que só pode ser usada para distinguir a diferença de mais de 2 vezes. O sistema de PCR digital pode detectar diferenças de expressão gênica tão baixas quanto 0,1 vezes pela fórmula de cálculo de distribuição de Poisson.
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A Para frequência de mutação, a PCR digital pode atingir 0,01% ou menos, e a cópia única pode ser alcançada para microorganismos; A RT-PCR pode atingir apenas 1%.
