Número Browse:0 Autor:editor do site Publicar Time: 2024-11-13 Origem:alimentado
-Facilitados na verdadeira implementação rápida da tecnologia de PCR digital no campo NIPT
Em meados de outubro de 2024, The Chinese Journal of Medical Genetics, Volume 41, Edição 10, publicou um artigo intitulado 'Consenso de especialistas sobre a aplicação da tecnologia de triagem pré-natal não invasiva de PCR digital para a implementação inicial de transtorno cromossômico fetal.CMAID.CMAID.CMAID.CMAID.CMAID.11 ' Doi: 10.3760/cma.j.cn511374- 20240318-00176). O consenso elabora os aspectos relevantes do DPCR-NIPT, incluindo: requisitos básicos, escopo de aplicação, processo de serviço de pré-teste, processo de teste, interpretação do relatório, aconselhamento genético e limitações da tecnologia.
A imagem do equipamento de PCR digital publicado no consenso de especialistas é a imagem original do instrumento da série Dropdx Scientific Rainsure, e os detalhes podem ser encontrados na seção de exibição de equipamentos e produtos do site científico Rainsure ( https://www.rainsurebio.com ).
A aneuploidia cromossômica fetal é um componente importante dos testes de triagem pré -natal, o que é benéfico para promover a eugenia e melhorar a qualidade do parto através de triagem pré -natal precoce e diagnóstico. O teste pré-natal da aneuploidia é uma abordagem tecnológica não invasiva, minimamente invasiva ou invasiva que examina mulheres grávidas durante um certo tempo para avaliar o risco de distúrbios da aneuploidia cromossômica fetal ou para confirmar ainda mais o diagnóstico. Os métodos de diagnóstico pré -natal convencionais são invasivos, com amniocentese, amostragem de vilosidades coriônicas e amostragem de punção de veia umbilical para análise de cariotipagem, que carrega um risco potencial de aborto ou infecção fetal. O triagem pré-natal de rotina no início e no meio do trimestre combina o exame de ultrassom com análise de biomarcadores séricos, juntamente com informações clínicas como idade materna, idade gestacional, peso e presença de diabetes, para calcular valores de risco usando software para avaliação. No entanto, a sensibilidade e a especificidade desses métodos são limitadas. Em 1997, Lo et al. Descobriu o DNA fetal sem células (DNA de CFF) no sangue periférico de mulheres grávidas, estabelecendo a base para testes pré-natais não invasivos (NIPT) para aneuploidia do cromossomo fetal. Em 2008, Lo et al. demonstrou ainda a viabilidade da detecção de aneuploidia cromossômica fetal com base no DNA de CFF no plasma materno e no sequenciamento de genoma em larga escala.
Nesse estágio, testes pré-natais não invasivos com base no NGS (sequenciamento da próxima geração) foram usados na triagem clínica para trissomia fetal 21, trissomia 18 e trissomia 13 síndromes e demonstrou alta sensibilidade, especificidade e taxa de detecção em gravidezes de alto risco. No entanto, o NGS-NIPT é afetado por uma variedade de fatores originários do feto, da mãe, do processo de sequenciamento e da análise de dados, o que pode resultar em resultados falsos positivos ou falsos negativos. Além disso, o custo dos testes NGS-NIPT é caro, dificultando a implementação rápida e eficaz em larga escala.
Com a introdução da tecnologia microfluídica, a PCR digital (DPCR), que representa a terceira geração da tecnologia de PCR, demonstrou maior eficiência e sensibilidade à detecção. Foi demonstrado que o DPCR tem o potencial de desenvolvimento mais direto, rápido e econômico em aplicações de NIPT de aneuploidia cromossômica. Além disso, a combinação das tecnologias DPCR-NIPT e NGS-NIPT para triagem pode melhorar ainda mais a precisão, a segurança e a pontualidade dos testes de triagem pré-natal para aneuploidias cromossômicas fetais.
Além disso, as recomendações relacionadas ao consenso estão resumidas abaixo:
Resumo das recomendações.
[Recomendação 1] O custo dos testes de DPCR-NIPT é comparável ao da triagem sorológica, enquanto sua taxa de detecção positiva é semelhante à do NIPT, tornando-a uma alternativa promissora à triagem pré-natal. Isso pode levar à formação de uma triagem pré-natal seqüencial e estratégia de diagnóstico de 'DPCR-NIPT para triagem inicial, NIPT para triagem secundária e diagnóstico pré-natal invasivo. '.
[Recomendação 2] Recomenda-se que o DPCR-NIPT seja realizado de acordo com os requisitos para pessoal, organização, reagentes e equipamentos.
[Recomendação 3] Referindo-se à triagem sorológica e ao NIPT, o DPCR-NIPT pode ser usado para a triagem simultânea de trissomia 21, trissomia 18 e trissomia 13. Além disso, dado que a incidência e o ônus da síndrome de Turner (45, X) e da síndrome de 22q11.2 da síndrome 13) são menos que o que a síndrome de 22q11.2) são NOTS, que não são mais que o que a síndrome de 22q11.2) são mais notáveis, da síndrome de 22q11. As combinações x e 22q11.2ds também podem ser executadas usando o DPCR-NIPT.
[Recomendação 4] Recomenda-se que as mulheres grávidas submetidas à triagem de DPCR-NIPT sejam categorizadas por populações apropriadas, de advertência e inadequada e para garantir o consentimento informado.
[Recomendação 5] Diferentes laboratórios podem estabelecer procedimentos padrão de DPCR-NIPT e sistemas de controle de qualidade de acordo com suas próprias condições e procedimentos pré-teste e intra-teste e controle de qualidade.
[Recomendação 6] Os critérios para determinar o risco de doenças cromossômicas fetais devem ser baseadas nos resultados do DPCR-NIPT.
[Recomendação 7] As estratégias de aconselhamento e tratamento genéticas devem ser fornecidas para diferentes riscos sugeridos pelo teste.
[Recomendação 8] Dadas as características do cffDNA e DPCR-NIPT, recomenda-se que as instituições médicas estabeleçam um mecanismo retrospectivo de 'aconselhamento ~ acompanhamento ' e também garantir que o trabalho de acompanhamento adequado seja realizado.
Sobre os desafios técnicos do DPCR-NIPT
Instrumento: Existem requisitos rigorosos para o desempenho do equipamento. Como os dispositivos de PCR digitais usados para o NIPT precisam diferenciar entre diferenças normais e anormais do número de cópias do DNA CFF (geralmente menos de 4%), eles requerem excelente precisão e reprodutibilidade. Dado que a diferença de número de cópia entre o DNA CFF normal e anormal está dentro de 5%, aumentando o número de gotículas (ou seja, número da partição) para amplificar a quantidade total de cfDNA na amostra pode aumentar a diferença na sensibilidade normal e anormal de cópias de DNA CFF, aumentando assim a detecção de detecção.
Em um estudo da DAI [16], foi calculado o número mínimo de gotículas exigidas em condições específicas. Em um cffDNA de 5% (0,05) e um PDR de 30% (0,3), foram necessários aproximadamente 18.000 gotículas ou reações de PCR para distinguir uma gravidez aneuploide de um nível de confiança aneuploide com um nível de confiança de 95% (desvio padrão de 1,96 vezes).
Reagentes: usados para NIPT requerem a realização de vários testes, mais alvos, mais precisos o teste. O princípio do reagente é amplificar a diferença de número de cópias entre amostras fetais normais e anormais, detectando vários alvos. Por exemplo, assumindo uma diferença de número de cópia de 1% entre um feto normal e um anormal, a diferença entre 100 cópias de um alvo é 1 cópia. Se 10 alvos forem testados, a diferença será colocada em 10 cópias, o que aumentará a sensibilidade do teste.
No estudo de Lašáková [15], os autores usaram 16 pares de iniciadores e duas sondas de ácido nucleico de trava de trava fluorescentemente para o cromossomo 21 e o cromossomo 18, respectivamente. Os resultados do teste e os procedimentos de diagnóstico invasivo estavam de acordo (sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo foram 100%). Em um estudo de DAI [16], 10 conjuntos de sondas do iniciador foram utilizados para testes multiplex de cromossomos 21, 18 e 13. Em um estudo de Tan [14], 10 ng de gDNA quebrado e diferentes números de pares de iniciadores (1, 5, 10 e 20 pares para o número de Chr21 e Chr18, respectivamente), foram utilizados para verificar o relacionamento entre os números entre os números e o número de Chr18, respectivamente, respectivamente). ddpcr. Os resultados mostraram que a quantidade de moléculas de DNA alvo detectada era altamente dependente do número de pares de iniciadores e que o aumento do número de pares de iniciadores pode aumentar o número de moléculas de DNA alvo detectadas, dada uma certa quantidade de DNA.
A seleção de equipamentos de PCR digital mais sensíveis e reagentes digitais de PCR digitais projetados e validados com precisão são essenciais para melhorar a sensibilidade e a especificidade do ensaio DPCR-NIPT.
Sobre a Rainsure Scientific Ltd. Co.
A Rainsure Scientific é uma empresa inovadora dedicada à Precision Diagnostics. A adesão à missão de 'Inovação, Fabricação Inteligente, Promoção da Saúde' ', o Rainsure Scientific está envolvido principalmente no desenvolvimento de plataformas de diagnóstico inovadoras e soluções de diagnóstico de IVD. A empresa desenvolveu instrumentos científicos líderes mundiais e produtos de diagnóstico molecular, incluindo plataformas de pesquisa microfluídica, sistemas de PCR digitais e kits de reagentes de suporte, com base nos avanços tecnológicos contínuos da empresa nos campos de microfluídica e fabricação inteligente. Os membros da equipe fundadora da empresa se formaram em universidades da Ivy League e trabalharam para vários fabricantes de ciências da vida reconhecidas internacionalmente, com rica experiência na indústria e perspectivas de ponta. A Rainsure Scientific está comprometida em capacitar os clientes com tecnologia inovadora e fabricação inteligente para promover o desenvolvimento do setor de saúde.
