Introdução da literatura | Tecnologia digital de PCR da RAINSure e MultityPE Plasmodium e monitoramento quantitativo de tratamento

_{Título: Um rápido ensaio multiplex de parasitas de malária humana por PCR digital}

_{Doi: 10.1016/j.cca.2022.12.001}

_{Jornal: Clinica Chimica Acta}

_{Unidade: Hospital Huashan afiliado à Universidade Fudan}

_{Publicado: dezembro de 2022}

_{Plataforma de pesquisa: Rainsure Scientific DropDX-2044 Sistema de PCR digital}

_{Em dezembro de 2022, a equipe de Ming Guan e Haoqin Jiang, do Huashan Hospital, afiliada à Universidade Fudan, publicou o artigo 'Um rápido ensaio multiplex de parasitas da malária humana por PCR digital' na revista 'clínica chimica acta '.}

_{Este estudo estabeleceu um novo sistema de PCR digital multiplex focado na detecção molecular rápida da infecção por malária de baixa concentração. É adequado para o diagnóstico de infecção por malária mista e monitoramento contínuo de múltiplas amostras, e como um importante método de detecção clínica para a quantificação absoluta de patógenos, para garantir um diagnóstico rápido e preciso de pacientes suspeitos de infecção por malária. A sensibilidade analítica do PCR multiplex é tão baixa quanto 0,557Copies/μL, a sensibilidade é de 98,0%e a especificidade é 100%, o que é especialmente adequado para o diagnóstico de infecção por malária de baixa concentração e monitoramento do efeito curativo durante o tratamento.}

_{Antecedentes de pesquisa}

_{A malária, a AIDS e a tuberculose são reconhecidas em todo o mundo como um dos três principais problemas públicos que colocam em risco a vida e a saúde humanas. Eles são uma doença parasitária causada por Plasmodium e transmitida por mosquitos Anopheles. De acordo com o último relatório da Who's World malária, existem aproximadamente 241 milhões de casos de malária em todo o mundo e 627.000 mortes por malária. Comparado com o ano anterior, houve cerca de 14 milhões de novos casos e 69.000 novas mortes.}

_{O Plasmodium é um esporo transmitido pelo mosquito Anopheles e é o agente causador da malária. Quatro tipos principais de Plasmodium que parasitam o corpo humano, incluindo Plasmodium vivax, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum e Plasmodium ovale. Esses parasitas da malária têm dois hospedeiros, mosquitos Anopheles e humanos. Eles parasitam em células hepáticas e glóbulos vermelhos sucessivamente em humanos. Nos eritrócitos, além da proliferação de esquizófitos, alguns merozoítos formam gametófitos e iniciam o desenvolvimento inicial da reprodução sexual.}

_{Em 2021, com zero casos de malária indígena em quatro anos, a China foi reconhecida com sucesso pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como um país livre de malária. Atualmente, os casos de infecção pela malária importados principalmente do exterior.}

_{Métodos de pesquisa}

_{Um total de 39 pacientes positivos para a malária diagnosticados por microscopia foram selecionados do Hospital Huashan de 2016 a 2021; 70 amostras de sangue foram coletadas desses pacientes. Além disso, 20 pessoas saudáveis, 20 pacientes com febris e 6 pacientes com outros tipos de parasitas infectados pelo sangue foram incluídos neste estudo. Cada amostra de sangue foi testada em paralelo pelo esfregaço de sangue e DPCR. Ao otimizar o sistema de detecção de sonda com marcação fluorescente quadruplicada quadruplicada, a capacidade quantitativa precisa do DPCR foi verificada e o número de cópia preciso por unidade de volume de amostras de sangue da malária clínica foi emitida. Um teste de diagnóstico rápido também foi usado para validar os resultados obtidos por DPCR.}

_{Resultados da pesquisa}

_{O sistema DPCR permite diagnóstico rápido e quantificação de amostras de DNA da malária. A sensibilidade analítica do DPCR multiplex foi tão baixa quanto 0,557 cópias/μL (IC 95%0,521-0,607), e sua sensibilidade para o diagnóstico de amostras clínicas foi de 98,0%e sua especificidade foi de 100%. Além disso, três amostras de co-infecção por plasmodium múltiplas foram detectadas pelo sistema DPCR, incluindo um caso de co-infecção por Plasmodium triplo. Ao testar continuamente amostras diárias de sangue dos 39 pacientes do estudo, o DPCR pode monitorar a eficácia dos tratamentos medicamentosos. Os resultados mostram que a faixa de concentração do Plasmodium falciparum DNA após a medicação é 0 cópia/μl-5474 cópia/μL, realizando o monitoramento em tempo real do efeito curativo dos medicamentos antimaláricos. O estudo também descobriu que o Plasmodium foi mais fácil e mais positivamente detectado usando amostras de células sanguíneas com depleção de plasma do que o sangue inteiro.}

_{O sistema de PCR digital multiplex pode detectar claramente dois ou três tipos de amostras de sangue inteiro de infecção da malária, para diagnosticar efetivamente infecções mistas da malária. Este é um suplemento ideal para o método tradicional de exame microscópico do sangue, que pode compensar oportunamente a detecção perdida de malária atípica em esfregaços de sangue e pacientes com infecção mista de baixa concentração, ajudando assim os médicos a ajustar os regimes de medicamentos em tempo hábil.}

_{O monitoramento contínuo de um paciente por até 20 dias mostrou que a PCR digital pode quantificar com precisão a concentração de malária no sangue inteiro do paciente, mostrar visualmente o status de infecção real do paciente e refletir a mudança da taxa de infecção por malária no paciente em tempo, a obtenção de um fins de manuseio em tempo real da eficácia de elástica de antimarialamento, é o tempo de relevo.}