Óleo de geração de gotículas

Na PCR digital de gotículas, o óleo de geração de gotículas desempenha um papel crucial no processo de particionar a mistura de reação de PCR em milhares ou milhões de gotículas individuais. Essas gotículas servem como vasos de reação discretos, cada um contendo uma fração das moléculas de DNA ou RNA alvo.

O óleo de geração de gotículas é um fluido especializado à base de óleo que é usado para criar e estabilizar as gotículas no DPCR. O óleo é imiscível com a mistura de reação de PCR, formando uma fase distinta que envolve e encapsula as gotículas da mistura de reação. Essa barreira do petróleo ajuda a isolar e compartimentar cada reação de PCR, impedindo a contaminação cruzada e garantindo quantificação precisa dos ácidos nucleicos alvo.

As principais características do petróleo de geração de gotículas Rainsure incluem:

1. Imiscibilidade: O óleo de geração de gotículas é imiscível com a mistura de reação de PCR. Isso garante que o óleo forma gotículas distintas, separando -as das gotículas da mistura de reação.

2. Estabilidade: o óleo é estável e mantém suas propriedades físicas durante o processo de ciclismo de PCR. Não evapora, degrada ou causa interferência na reação da PCR.

3. Transparência óptica: o óleo possui alta transparência óptica para permitir a detecção e análise eficientes dos sinais fluorescentes gerados durante o DPCR.

4. INERGUNDADE: O óleo é quimicamente inerte para evitar interferir na reação de PCR e na amplificação do DNA.

Durante o processo de DPCR, a mistura de óleo de geração de gotículas e reação são emulsionadas. Este processo de emulsificação cria uma suspensão estável de gotículas, com cada gota contendo uma única molécula de alvo ou nenhuma. As gotículas geradas com a ajuda do óleo de geração de gotículas são subsequentemente submetidas a ciclismo térmico, onde ocorre a amplificação da PCR. Após a amplificação, as gotículas são analisadas individualmente para determinar a presença ou ausência da molécula alvo com base nos sinais de fluorescência.

Em resumo, o óleo de geração de gotículas é um componente crítico na PCR digital de gotículas, pois permite a formação e estabilização de gotículas individuais que contêm a mistura de reação de PCR. Permite o particionamento preciso e o isolamento dos ácidos nucleicos alvo, facilitando a quantificação e análise precisas em ensaios de DPCR.