Literatura Introdução |Tecnologia de PCR digital Rainsure e tipagem e tratamento de plasmódio multitipo Monitoramento quantitativo

_{Título: Um ensaio multiplex rápido de parasitas da malária humana por PCR digital}

_{DOI: 10.1016/j.cca.2022.12.001}

_{Jornal: Clinica Chimica Acta}

_{Unidade: Hospital Huashan afiliado à Universidade Fudan}

_{Publicação: dezembro de 2022}

_{Plataforma de pesquisa: Rainsure Scientific DropDx-2044 Digital PCR System}

_{Em dezembro de 2022, a equipe de Ming Guan e Haoqin Jiang do Huashan Hospital Affiliated to Fudan University publicou o artigo 'A fast multiplex assay of human malaria parasitas by digital PCR' na revista 'Clinica Chimica Acta'.}

_{Este estudo estabeleceu um novo sistema de PCR digital multiplex focado na detecção molecular rápida de infecção por malária de baixa concentração.É adequado para o diagnóstico de infecção por malária mista e monitoramento contínuo de múltiplas amostras, e como um importante método de detecção clínica para a quantificação absoluta de patógenos, para garantir um diagnóstico rápido e preciso de pacientes com suspeita de infecção por malária.A sensibilidade analítica da PCR multiplex é tão baixa quanto 0,557cópias/μL, a sensibilidade é de 98,0% e a especificidade é de 100%, o que é especialmente adequado para o diagnóstico de infecção por malária de baixa concentração e o monitoramento do efeito curativo durante o tratamento .}

_{Histórico de pesquisa}

_{A malária, a AIDS e a tuberculose são reconhecidas mundialmente como um dos três principais problemas públicos que colocam em risco a vida e a saúde humana.São uma doença parasitária causada por Plasmodium e transmitida por mosquitos Anopheles.De acordo com o último Relatório Mundial da Malária da OMS, existem aproximadamente 241 milhões de casos de malária em todo o mundo e 627.000 mortes por malária.Face ao ano anterior, registaram-se cerca de 14 milhões de novos casos e 69 mil novos óbitos.}

_{Plasmodium é um esporo transmitido pelo mosquito Anopheles e é o agente causador da malária.Quatro tipos principais de Plasmodium que parasitam o corpo humano, incluindo Plasmodium vivax, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum e Plasmodium ovale.Esses parasitas da malária têm dois hospedeiros, mosquitos Anopheles e humanos.Eles parasitam células do fígado e glóbulos vermelhos sucessivamente em humanos.Nos eritrócitos, além da proliferação dos esquizófitos, alguns merozoítos formam gametófitos e iniciam o desenvolvimento inicial da reprodução sexuada.}

_{Em 2021, com zero casos indígenas de malária em quatro anos, a China foi reconhecida com sucesso pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como um país livre de malária.Atualmente, os casos de infecção por malária são importados principalmente do exterior.}

_{Métodos de pesquisa}

_{Um total de 39 pacientes positivos para malária diagnosticados por microscopia foram selecionados no Hospital Huashan de 2016 a 2021;Foram coletadas 70 amostras de sangue desses pacientes.Além disso, 20 pessoas saudáveis, 20 pacientes febris e 6 pacientes com outros tipos de parasitas infectados pelo sangue foram incluídos neste estudo.Cada amostra de sangue foi testada em paralelo por esfregaço de sangue e dPCR.Ao otimizar o sistema de detecção de sonda fluorescente quádrupla de sistema único, a capacidade quantitativa precisa do dPCR foi verificada e o número preciso de cópias por unidade de volume de amostras clínicas de sangue para malária foi gerado.Um teste rápido de diagnóstico também foi usado para validar os resultados obtidos por dPCR.}

_{Resultados da pesquisa}

_{O sistema dPCR permite diagnóstico rápido e quantificação de amostras de DNA de malária.A sensibilidade analítica do multiplex dPCR foi tão baixa quanto 0,557 cópias/μL (95% CI 0,521-0,607), e sua sensibilidade para o diagnóstico de espécimes clínicos foi de 98,0%, e sua especificidade foi de 100%.Além disso, três amostras de coinfecção múltipla por Plasmodium foram detectadas pelo sistema dPCR, incluindo um caso de coinfecção tripla por Plasmodium.Ao testar continuamente amostras de sangue diárias dos 39 pacientes do estudo, a dPCR pode monitorar a eficácia dos tratamentos com drogas.Os resultados mostram que a faixa de concentração de DNA de Plasmodium falciparum após a medicação é de 0 cópia/μL-5474 cópia/μL, realizando o monitoramento em tempo real do efeito curativo dos medicamentos antimaláricos.O estudo também descobriu que o Plasmodium foi mais fácil e positivamente detectado usando amostras de células sanguíneas com depleção de plasma do que sangue total.}

_{O sistema de PCR digital multiplex pode detectar claramente dois ou três tipos de amostras de sangue total de infecção mista de malária, para diagnosticar efetivamente várias infecções mistas de malária.Este é um complemento ideal para o método tradicional de exame microscópico de esfregaço de sangue, que pode compensar a detecção oportuna de malária atípica em esfregaços de sangue e pacientes com infecção mista de baixa concentração, ajudando assim os médicos a ajustar os regimes de medicação em tempo hábil.}

_{O monitoramento contínuo de um paciente por até 20 dias mostrou que a PCR digital pode quantificar com precisão a concentração de malária no sangue total do paciente, mostrar visualmente o estado real da infecção do paciente e refletir a mudança da taxa de infecção da malária no paciente ao longo do tempo , alcançando o objetivo de monitorar em tempo real a eficácia dos medicamentos antimaláricos, é fornecer evidências laboratoriais mais confiáveis ​​para a eliminação da malária em pacientes.}