PCR digital de gotículas (ddPCR)

A reação em cadeia da polimerase digital (dPCR) é um refinamento biotecnológico dos métodos convencionais de reação em cadeia da polimerase que podem ser usados ​​para quantificar diretamente e amplificar clonalmente cadeias de ácidos nucleicos, incluindo DNA, cDNA ou RNA.A principal diferença entre a dPCR e a PCR tradicional está no método de medição das quantidades de ácidos nucleicos, sendo a primeira um método mais preciso do que a PCR.Como o PCR, no dPCR, uma única reação também é realizada dentro de uma amostra, mas a amostra é dividida em várias partições, com a reação sendo realizada em cada partição separadamente.Com esta divisão, as quantidades de ácido nucleico podem ser coletadas e medidas com mais precisão e sensibilidade.A técnica é usada regularmente para amplificação clonal de materiais para sequenciamento de próxima geração e tem se mostrado benéfica para analisar alterações em sequências de genes, incluindo variantes de número de cópias e mutações pontuais.O Droplet Digital PCR (ddPCR) é uma técnica para dPCR na qual uma reação de amostra de 20 microlitros é dividida em gotas de óleo do tamanho de 20.000 nanolitros usando uma técnica de emulsão água-óleo, termociclada em um cartucho microfluídico e a amplitude de fluorescência de cada gota em cada poço de amostra é lido usando um scanner de gotículas.